可見分光光度計的測量誤差可能來源于儀器、操作和樣品等多個方面。通過定期校準儀器、規(guī)范操作流程、優(yōu)化樣品處理及合理數(shù)據(jù)分析，可以有效減少誤差，提高測量結(jié)果的準確性和重復(fù)性。在實際應(yīng)用中，實驗人員應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行，并結(jié)合具體實驗條件調(diào)整優(yōu)化方法，以確保數(shù)據(jù)的可靠性。
一、可見分分光光度計測量誤差的主要來源
1.儀器本身的誤差
-光源不穩(wěn)定：可見分光光度計通常使用鎢燈或鹵鎢燈作為光源，如果光源老化或電壓波動，會導(dǎo)致光強不穩(wěn)定，影響吸光度測量。
-單色器性能不佳：單色器的光柵或棱鏡若存在波長偏差，會導(dǎo)致入射光的波長不準確，使測量值與真實值偏離。
-檢測器靈敏度下降：光電管或光電二極管等檢測器若老化或受污染，會影響信號采集的準確性。
-比色皿不匹配：比色皿的材質(zhì)、厚度或光程不一致，會導(dǎo)致吸光度測量偏差。
2.操作誤差
-波長設(shè)置錯誤：未正確選擇待測物質(zhì)的最大吸收波長（λ<sub>max</sub>），導(dǎo)致吸光度偏低。
-空白校正不當：未使用合適的空白溶液（如溶劑空白、試劑空白）進行基線校正，導(dǎo)致背景干擾未被扣除。
-比色皿使用不當：比色皿外壁有指紋、污漬或劃痕，或未正確放置（光路方向錯誤），均會影響光透過率。
-樣品濃度超出線性范圍：朗伯-比爾定律僅適用于低濃度范圍（通常吸光度A在0.2~0.8之間），若樣品濃度過高，會導(dǎo)致非線性響應(yīng)。
3.樣品因素引起的誤差
-樣品渾濁或沉淀：懸浮顆粒或沉淀物會導(dǎo)致光散射，使吸光度偏高。
-化學(xué)反應(yīng)干擾：樣品中的其他成分可能與待測物發(fā)生反應(yīng)，改變其吸光特性。
-溶劑效應(yīng)：不同溶劑的折射率不同，可能影響吸光度的測量。
二、減少測量誤差的方法
1.儀器校準與維護
-定期校準波長：使用標準濾光片（如鈥玻璃）或鐠釹濾光片檢查波長準確性，必要時進行調(diào)整。
-檢查光源穩(wěn)定性：確保電源電壓穩(wěn)定，必要時更換老化光源。
-保持檢測器清潔：避免灰塵或樣品殘留影響光電轉(zhuǎn)換效率。
-匹配比色皿：使用同一批次的比色皿，并在測量前用空白溶液校正。
2.規(guī)范操作流程
-選擇合適的測量波長：通過掃描樣品的吸收光譜，確定最大吸收峰（λ<sub>max</sub>）后再進行測量。
-正確使用空白校正：每次測量前用空白溶液調(diào)零，以扣除溶劑和試劑的背景吸收。
-控制樣品濃度：若吸光度超出線性范圍（A>1.0），可適當稀釋樣品。
-正確操作比色皿：使用前用擦鏡紙清潔外壁，避免手指直接接觸光面，并確保光路方向一致。
3.優(yōu)化樣品處理
-去除渾濁或沉淀：通過離心或過濾使樣品澄清，減少光散射影響。
-避免化學(xué)反應(yīng)干擾：選擇合適的緩沖體系或掩蔽劑，防止副反應(yīng)發(fā)生。
-使用相同溶劑體系：確保標準溶液和待測樣品的溶劑一致，避免折射率差異帶來的誤差。
4.數(shù)據(jù)處理與重復(fù)測量
-多次測量取平均值：減少隨機誤差，提高數(shù)據(jù)可靠性。
-繪制標準曲線：使用系列標準溶液建立校準曲線，確保線性關(guān)系良好（R²>0.99）。
